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虹彩病毒是变温脊椎动物的一种重要病原体，被认为是对水产养殖鱼类生产的一个重大威胁。其中，大黄鱼虹彩病毒自2003年首次被报道以来，由于缺乏合适的细胞培养模型，研究进展缓慢。近日，凌恩生物客户浙江省海洋水产研究所及福建农林大学发表文章“Genetic and Pathogenic Characterization of a New Iridovirus Isolated from Cage-Cultured Large Yellow Croaker (Larimichthys crocea) in China”，组装获得了大黄鱼（Larimichthys crocea）中虹彩病毒基因组，并首次对大黄鱼中虹彩病毒的遗传和致病性特征化进行系统研究，扩展了研究人员对虹彩病毒的了解。 + v$ }3 @1 `& c4 C6 a3 ~$ H r( y4 F
" v; s R8 |2 w9 R! j. f7 F& p 发表期刊：Viruses（IF=5.818） h& I; C( ^( H
发表时间：2022 : |! V0 `/ N7 s' j6 t8 H# R- O
样本类型：大黄鱼的鳃、脾脏和肾脏的组织样本
$ ~; H0 Z# [! Q4 U6 ^- g 作者单位：浙江省海洋水产研究所&福建农林大学 G+ X5 C/ O) }4 [' D7 \$ g
实验方法：电镜观察、病毒基因组测序等 # y+ K' h# D5 e& R. j
主要结果
" K8 H0 u* e0 X 1、病原体的鉴定 * B% a! V' T0 p" {9 n, h) {6 W
根据电镜结果，细胞质中有大量的病毒颗粒。病毒颗粒直径为150-200 nm，具有电子致密核心（图1）。qPCR结果表明，6条感染鱼中有3条对大黄鱼虹彩病毒（LYCIV）呈阳性，Ct值分别为28.11、23.76和31.30。其余三个样品的Ct值分别为0、36.76和37.84。
% X5 y, [1 C# X- r/ _7 W 图1 脾脏组织细胞中病毒颗粒的电镜图。A，多个病毒在同一个细胞中；B，在放大的图像中可见成熟病毒粒子的外膜和中央电子透光核。2、病毒基因组测序和系统发育分析
+ W) k2 H2 x# i$ H* g 本研究组装得到病毒基因组（NCBI登录号：MW139932）全长为112,043 bp，GC含量为53.5%（表1）。共鉴定出120个ORF在有义（R）和反义（L）DNA链上编码45-1169个氨基酸的蛋白质。其中43个基因与其他虹彩病毒的基因高度同源，并具有明确的功能（图2）。 % o7 D) w. A# n
表1 LYCIV-ZS-2020全长基因组的核苷酸鉴定图2 LYCIV-ZS-2020基因组结构系统发育进化树结果表明，本研究获得的病毒与鲳鲹虹彩病毒系统发育紧密聚集，形成了在亚洲分离的其他海洋鱼类虹彩病毒属中的病毒的亚系（图3），将这种新型病毒命名为大黄鱼虹彩病毒Larimichthys crocea IridovirusZS-2020（LYCIV-ZS-2020）。
/ o* | A8 J$ B+ i4 n7 K7 q6 s 图3 LYCIV-ZS-2020和其他代表性虹彩病毒进行系统发育树分析3、MCP的原核表达和纯化以及特异性抗体的产生 }* g' Q9 K8 m( F5 G3 Y+ A
SDS-PAGE和蛋白质印迹（WB）分析结果表明，MCP蛋白分子量约为50 kDa。免疫荧光法（IFA）显示pcDNA-3.1-MCP重组质粒转染细胞有特异性荧光，而免疫前血清转染细胞中未检测到信号（图4）。
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0 |; ?- ~, Y2 ]2 i: z# t 图4 LYCIVMCP蛋白的表达及抗体的制备4、LYCIV-ZS-2020在大黄鱼中的致病性 % }6 ]* U4 z& I- t6 s7 ?
感染LYCIV-ZS-2020的大黄鱼组显示累积死亡率为52%，主要在注射后4至9天死亡。在模拟感染组中，在注射后9，10和12天死亡（图5A）。通过qPCR对组织样本的分析显示，在感染鱼类的脾脏、肾脏、鳃和头肾中检测到LYCIV，在注射后14天内可持续检测到相当数量的病毒基因组拷贝。
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本研究鉴定出一个新的大黄鱼虹彩病毒株，完成了其全基因组测序，并开展了致病性研究，为大黄鱼虹彩病毒防控奠定了理论基础和数据支持。 7 n" y% [( f* I
凌恩生物具有丰富的病毒基因组项目经验，目前已成功完成猫冠状病毒、疱疹病毒基因组等项目，可以对全新的病毒进行测序分析，利用生物信息分析手段，得到病毒的全基因组序列，解析编码信息，并获得相应的变异信息，多种基因预测软件+人工校正确保基因预测结果更加准确！更有比较基因组分析等满足个性化科研分析要求！ " _5 j5 v. v# \4 @
参考文献：Genetic and Pathogenic Characterization of a New Iridovirus Isolated from Cage-Cultured Large Yellow Croaker (Larimichthys crocea) in China.
% u2 x) f+ G+ h6 T6 y+ A } DOI: 10.3390/v14020208 ! u1 n; P0 t0 l
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