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原标题:彗星法DNA损伤分析试剂盒,快速灵敏测试 o5 }% X9 l+ X5 u& I3 o! L) b
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彗星检测试剂盒(3孔载玻片)是一种单细胞凝胶电泳检测(SCGE),用于检测细胞中DNA损伤的快速灵敏测试。其原理是,在器官或组织遭受(如辐射、重金属等)后,细胞中的单链或双链DNA断裂,将细胞与融化的琼脂混合并放在玻片上,然后用裂解溶液破坏细胞膜,用碱性溶液解开DNA。最后,对样品进行电泳,在电场的作用下,正常细胞的大分子DNA迁移较短的距离,完整的DNA保留在细胞核的范围内,DNA碎片从细胞核中迁移出来,用PI染料染色,在荧光显微镜下观察,完整的脱氧核糖核酸形成圆形或微辫状;DNA碎片形成彗星状图案。根据电泳缓冲液的pH值,可分为中性彗星试验(pH=8.4)和碱性彗星试验(pH>13)。中性彗星法主要用于检测DNA双链断裂损伤,碱性彗星法具有较高的灵敏度,可用于检测较少的单链和双链断裂损害。
6 J( ~7 b* V' A" ^3 ]2 c 艾美捷彗星法DNA损伤分析试剂盒: # p* G, }. Z, |& j( ^- o9 G
目录号:D-AKE3040 3 n7 H) m' m9 _/ n5 R+ S) f! C
尺寸:15T % f6 P/ W, y8 K; R- F( s
储存:在4°C下储存6个月,避光 2 [) z; I6 t6 }- v. [& C
彗星法DNA损伤分析试剂盒(3孔载玻片):
( I2 B# G& f+ x* ` 套件组件尺寸(15T)储存条件 . s- _0 N; M( A7 r4 J
彗星载玻片(3孔)5 4℃ 8 X, Z% W1 M1 A s) W
10×赖氨酸溶液15 mL 4℃ ; f" m9 s" i% Z
EDTA(500 mM)25 mL 4℃
8 A4 k L3 T' A, g 琼脂(低熔点)15 mL 4℃
$ t& b9 Y2 r3 m; X, S3 h 碘化丙啶(PI)(50x)20μL 4℃,避光 7 |# }# Q- f8 ` c! D0 O. x
40 mM Tris-HCl(pH 7.5)15 mL 4℃
/ x/ T+ M6 F1 J! x" r 彗星法DNA损伤分析试剂盒试剂准备:
% e: D) E9 _9 o( n z 彗星幻灯片(3孔):随附随用。使用前将其平衡至室温。在4℃下储存。10×赖氨酸溶液:供应即用。使用前将其平衡至室温。在4℃下储存。EDTA(500mM):供应时即用。使用前将其平衡至室温。储存温度为4℃。
% U6 Z" l6 _7 G5 q K0 E8 z 琼脂(低熔点):将琼脂(低沸点)瓶在90-95°C的水浴中加热20min,直到琼脂液化。将瓶子转移到37°C水浴中20分钟以保持液态。将其余部分等分并在4℃下储存。
. R4 m; t5 Z( e, h 碘化丙啶(PI)(50×):使用前新鲜制备,用PBS稀释50倍至1×PI染料浓度,在4°C下储存并避光。
! C# I4 @! j3 I4 K' D$ h5 g 40 mM Tris-HCl(pH 7.5):在使用前制备,用PBS稀释100倍至0.4 mM Tris-HCl(pH7.5)的浓度,并在4°C下储存。 ' g: O7 f4 `, k9 Q6 R/ R( A
1×裂解缓冲液:制备100 mL 1×裂解液
2 F1 i E, w; V9 O& |/ n ` 可以使用以下方法之一测量尾力矩:
" B9 u) K& m! W: B (a) 橄榄尾力矩=尾DNA%×尾力矩长度(从头部中心到尾部中心测量,见图1) & ?, L9 z/ u( x
(b) Extent Tail Moment=Tail DNA%×Tail Length(见图1)彗星测定结果分析软件可通过Opencomet、CASPlab和彗星测定IV(PerceptiveInstruments)等获得。
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图1:彗星试验中的DNA损伤。
; F5 V% N; u* W8 u; [! N8 J 图2:定性方法:DNA损伤按尾DNA%的比例分为五级 * g% `% V- V1 [: b4 r, H! B
该试剂仅用于科学研究领域,不适用于临床诊断或其他用途。返回搜狐,查看更多
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; m+ `0 s+ K: R' L% b1 f- @* x7 ? 责任编辑: & X3 }! a% B% i1 t. z6 U
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