收藏本站 劰载中...网站公告 | 吾爱海洋论坛交流QQ群:835383472

彗星法DNA损伤分析试剂盒,快速灵敏测试 - 海洋生物DNA分析

[复制链接]
+ x( X. n2 w8 z% |/ _- l- w5 i

原标题:彗星法DNA损伤分析试剂盒,快速灵敏测试

y( H3 F3 O% x9 E, G; Q$ e4 i8 `8 N- a t+ }$ R

彗星检测试剂盒(3孔载玻片)是一种单细胞凝胶电泳检测(SCGE),用于检测细胞中DNA损伤的快速灵敏测试。其原理是,在器官或组织遭受(如辐射、重金属等)后,细胞中的单链或双链DNA断裂,将细胞与融化的琼脂混合并放在玻片上,然后用裂解溶液破坏细胞膜,用碱性溶液解开DNA。最后,对样品进行电泳,在电场的作用下,正常细胞的大分子DNA迁移较短的距离,完整的DNA保留在细胞核的范围内,DNA碎片从细胞核中迁移出来,用PI染料染色,在荧光显微镜下观察,完整的脱氧核糖核酸形成圆形或微辫状;DNA碎片形成彗星状图案。根据电泳缓冲液的pH值,可分为中性彗星试验(pH=8.4)和碱性彗星试验(pH>13)。中性彗星法主要用于检测DNA双链断裂损伤,碱性彗星法具有较高的灵敏度,可用于检测较少的单链和双链断裂损害。

4 h, g9 r1 n" A9 `; z1 [$ @8 z

艾美捷彗星法DNA损伤分析试剂盒:

1 N+ w& W5 N+ w, w$ o" p7 J

目录号:D-AKE3040

* q5 ]* s! L/ t& U3 M2 C3 w: D9 ^

尺寸:15T

. m" a$ l* L( [

储存:在4°C下储存6个月,避光

; Q! G0 J& s+ P* Z" |7 t! Z" a6 O' `

彗星法DNA损伤分析试剂盒(3孔载玻片):

& c' d; E- F0 @3 X/ @! z

套件组件尺寸(15T)储存条件

5 g7 |/ z% u$ R8 q

彗星载玻片(3孔)5 4℃

q7 h) T+ @, r

10×赖氨酸溶液15 mL 4℃

$ F) e* B" s. m# I# P

EDTA(500 mM)25 mL 4℃

# I# U4 v" k- P' R& g" ~

琼脂(低熔点)15 mL 4℃

3 ^; [* T8 Y& C. \" B' s. W! y6 x) e0 m

碘化丙啶(PI)(50x)20μL 4℃,避光

; p& M2 F E4 d( U5 ^5 ^: a0 L/ [

40 mM Tris-HCl(pH 7.5)15 mL 4℃

# [5 o5 k, e3 V+ K

彗星法DNA损伤分析试剂盒试剂准备:

3 ^" Y4 y5 A3 M; }6 ?; y

彗星幻灯片(3孔):随附随用。使用前将其平衡至室温。在4℃下储存。10×赖氨酸溶液:供应即用。使用前将其平衡至室温。在4℃下储存。EDTA(500mM):供应时即用。使用前将其平衡至室温。储存温度为4℃。

' o8 ^+ q: I" @. I* t

琼脂(低熔点):将琼脂(低沸点)瓶在90-95°C的水浴中加热20min,直到琼脂液化。将瓶子转移到37°C水浴中20分钟以保持液态。将其余部分等分并在4℃下储存。

# [5 c( Y3 G( H

碘化丙啶(PI)(50×):使用前新鲜制备,用PBS稀释50倍至1×PI染料浓度,在4°C下储存并避光。

) V; g8 M% V" X, N$ n

40 mM Tris-HCl(pH 7.5):在使用前制备,用PBS稀释100倍至0.4 mM Tris-HCl(pH7.5)的浓度,并在4°C下储存。

/ l* e0 j4 d8 E0 P0 O$ Q

1×裂解缓冲液:制备100 mL 1×裂解液

: _; U! K& U" \

可以使用以下方法之一测量尾力矩:

6 B, G9 A: X7 y: Q

(a) 橄榄尾力矩=尾DNA%×尾力矩长度(从头部中心到尾部中心测量,见图1)

% f5 b4 V1 b# W+ `7 j

(b) Extent Tail Moment=Tail DNA%×Tail Length(见图1)彗星测定结果分析软件可通过Opencomet、CASPlab和彗星测定IV(PerceptiveInstruments)等获得。

) F9 y8 v& O2 ?( M6 T1 R

+ |; X. S$ E8 i0 P8 n8 d

图1:彗星试验中的DNA损伤。

6 P$ _, L0 }+ Q

图2:定性方法:DNA损伤按尾DNA%的比例分为五级

$ V7 B# c; K4 l% q( O H A/ w

该试剂仅用于科学研究领域,不适用于临床诊断或其他用途。返回搜狐,查看更多

( ^* E' F+ B, m8 Y/ T' n. M4 C, `9 V: o& m: X- E8 S' w

责任编辑:

( w9 a7 A6 x6 c3 b+ J y% |9 |- v& f, k$ d " G; v% n1 J& l6 F 1 {$ m @9 O: T) _' F * p+ r0 r/ A# L! R2 J
回复

举报 使用道具

相关帖子

全部回帖
暂无回帖,快来参与回复吧
懒得打字?点击右侧快捷回复 【吾爱海洋论坛发文有奖】
您需要登录后才可以回帖 登录 | 立即注册
關錕嶺
活跃在前天 13:33
快速回复 返回顶部 返回列表