彗星法DNA损伤分析试剂盒，快速灵敏测试 - 海洋生物DNA分析

原标题：彗星法DNA损伤分析试剂盒，快速灵敏测试

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彗星检测试剂盒（3孔载玻片）是一种单细胞凝胶电泳检测（SCGE），用于检测细胞中DNA损伤的快速灵敏测试。其原理是，在器官或组织遭受（如辐射、重金属等）后，细胞中的单链或双链DNA断裂，将细胞与融化的琼脂混合并放在玻片上，然后用裂解溶液破坏细胞膜，用碱性溶液解开DNA。最后，对样品进行电泳，在电场的作用下，正常细胞的大分子DNA迁移较短的距离，完整的DNA保留在细胞核的范围内，DNA碎片从细胞核中迁移出来，用PI染料染色，在荧光显微镜下观察，完整的脱氧核糖核酸形成圆形或微辫状；DNA碎片形成彗星状图案。根据电泳缓冲液的pH值，可分为中性彗星试验（pH=8.4）和碱性彗星试验（pH>13）。中性彗星法主要用于检测DNA双链断裂损伤，碱性彗星法具有较高的灵敏度，可用于检测较少的单链和双链断裂损害。

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艾美捷彗星法DNA损伤分析试剂盒：

目录号：D-AKE3040

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尺寸：15T

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储存：在4°C下储存6个月，避光

彗星法DNA损伤分析试剂盒（3孔载玻片）:

套件组件尺寸（15T）储存条件

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彗星载玻片（3孔）5 4℃

10×赖氨酸溶液15 mL 4℃

EDTA（500 mM）25 mL 4℃

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琼脂（低熔点）15 mL 4℃

碘化丙啶（PI）（50x）20μL 4℃，避光

40 mM Tris-HCl（pH 7.5）15 mL 4℃

彗星法DNA损伤分析试剂盒试剂准备：

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彗星幻灯片（3孔）：随附随用。使用前将其平衡至室温。在4℃下储存。10×赖氨酸溶液：供应即用。使用前将其平衡至室温。在4℃下储存。EDTA（500mM）：供应时即用。使用前将其平衡至室温。储存温度为4℃。

琼脂（低熔点）：将琼脂（低沸点）瓶在90-95°C的水浴中加热20min，直到琼脂液化。将瓶子转移到37°C水浴中20分钟以保持液态。将其余部分等分并在4℃下储存。

碘化丙啶（PI）（50×）：使用前新鲜制备，用PBS稀释50倍至1×PI染料浓度，在4°C下储存并避光。

40 mM Tris-HCl（pH 7.5）：在使用前制备，用PBS稀释100倍至0.4 mM Tris-HCl（pH7.5）的浓度，并在4°C下储存。

1×裂解缓冲液：制备100 mL 1×裂解液

可以使用以下方法之一测量尾力矩：

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（a） 橄榄尾力矩=尾DNA%×尾力矩长度（从头部中心到尾部中心测量，见图1）

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（b） Extent Tail Moment=Tail DNA%×Tail Length（见图1）彗星测定结果分析软件可通过Opencomet、CASPlab和彗星测定IV（PerceptiveInstruments）等获得。

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图1：彗星试验中的DNA损伤。

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图2：定性方法：DNA损伤按尾DNA%的比例分为五级

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该试剂仅用于科学研究领域，不适用于临床诊断或其他用途。返回搜狐，查看更多

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